qRT-PCR检测细胞、组织中miRNAs的表达水平:
服务优势:
1. 准确确定miRNAs的时空表达量;
2. 为miRNAs功能研究提供实验依据。
服务流程:
1. 根据目的microRNA设计特异的茎环逆转录引物及定量PCR引物;
2. RNA抽提;
3. RNA定量及质量检测;
4. 使用茎环引物进行逆转录;
5. 使用SYBR Green法进行实时定量PCR;
6. 数据处理;
7. 向客户提交数据分析结果与实验报告。
microRNA、靶基因预测与验证服务:
miRNA调控靶基因的生物信息学预测服务
miRNA靶基因的预测是其功能研究的关键环节,对于研究论文的深度与完整性尤为重要。的技术人员使用至少三种以上的在线工具进行miRNAs靶基因的预测。
Sensor Reporter的构建与活性检测服务
miRNAs调控靶基因表达的机制:当miRNAs与靶基因的3’UTR结合后,主要抑制靶mRNA的翻译,可以用Western Blot检测靶蛋白的表达水平;也有部分表现为对靶mRNA的降解,可以用qRT-PCR 进行检测。但是这两种方法都不能有效说明是miRNAs直接作用的结果。直接的证据在于SensorReporter的构建与活性检测,用Promega特有的psiCHECH载体,对miRNAs与靶基因3’UTR的关系作出准确的判断。
服务优势:
直接、准确的判断miRNAs作用的靶基因
服务流程:
1. 将靶基因的3’URT片段克隆至报告载体psiCHECH载体;
2. 合成miRNA模拟物;
3. 将报告载体与miRNA模拟物共转待检细胞;
4. 检测报告基因的表达水平。
DNA甲基化与基因表达、肿瘤发生以及染色体结构维持有密切关系,是一个重要的基因外遗传信号,现在越来越多的科研工作者开始通过DNA甲基化检测探索生物现象与机理之间的关系。
目前,基因的甲基化检测主要是结合亚硫酸氢钠处理和PCR技术,分为甲基化特异性PCR(Methylation specific PCR, MSP)和硫化测序PCR(Bisulfite sequencing PCR,BSP).
服务流程:
根据目的基因启动子序列设计相应引物;基因组DNA的提取和定量;亚硫酸氢钠修饰基因组DNA;修饰后DNA纯化回收;对PCR产物进行克隆测序并经未处理的序列比较;数据处理,并向客户提交数据分析结果与实验报告。